Mgが無くても発色

 ルーティンでずうっと長いことやっている実験のプロトコール、10年に一度くらいはメーカーが更新していないか、確認してみてもいいかもしれません。

mRNAの発現局在を調べるin situ hybridizationという実験では、NBT/BCIPで発色させ検出する場合、アルカリフォスファターゼという酵素の働きを利用します。

酵素が働くには2価の陽イオンが必要、ということで古くからのプロトコールでは発色液にMgCl2を添加していました。

Rocheのハンドブック（4th ed, 2008？）でもMgCl2は添加することになっています。

ところがネットにあるRocheのNBT/BCIP stock solutionの取説（Ver8, 2016）をみてみたら、DIGシステムでのNBT/BCIP発色にはMgCl2無しで良いとなっています。

従来の使用試薬やプロトコール条件下で、MgCl2無しで実際にやってみたところ、発色できました。しかも析出物が出ず、いつもより綺麗。

目からうろこでした。